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非洲豬瘟（ASF）是由非洲豬瘟病毒（ASFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成毀滅性打擊。該病毒是目前已知的唯一蟲媒DNA病毒，基因組長(zhǎng)度約170~190 kb，編碼151~167個(gè)ORFs。由于病毒基因組龐大且復(fù)雜，許多病毒蛋白功能未知，發(fā)病機(jī)制和免疫逃避機(jī)制也尚不明確，獸醫(yī)臨床暫無安全、有效的疫苗及特效藥物可用于該病的防控。為探究病毒蛋白在免疫逃逸方面發(fā)揮的作用，本團(tuán)隊(duì)前期已經(jīng)開展了大量系統(tǒng)性研究，先后證明了DP96R、MGF360-12L、MGF360-14L、M1249L等基因在ASFV免疫逃逸方面的調(diào)控作用。

ASFV的E120R為一種衣殼蛋白，又稱為p14.5，是一種晚期蛋白，是ASFV的關(guān)鍵毒力因子，可與p72衣殼蛋白相互作用，對(duì)ASFV的轉(zhuǎn)運(yùn)非常重要。E120R可在翻譯后進(jìn)行N端乙酰化修飾，且E120R可通過干擾IRF3對(duì)TBK1的招募，從而抑制IFN-β的產(chǎn)生，進(jìn)而逃避宿主免疫應(yīng)答，但是否有其他途徑參與調(diào)節(jié)宿主的免疫反應(yīng)還未知。

近年來，抵御病原體感染中發(fā)揮出強(qiáng)大功能的一種細(xì)胞質(zhì)內(nèi)DNA感受器--環(huán)磷酸鳥苷-腺苷一磷酸合成酶(cGAS)引起廣泛關(guān)注，cGAS可識(shí)別病原體DNA，催化第二信使的生成，激活干擾素基因刺激因子(STING)，從而誘導(dǎo)抗病毒反應(yīng)。鑒于此，本研究擬以非洲豬瘟病毒E120R為研究對(duì)象，探討E120R與宿主的相互作用及調(diào)節(jié)免疫的機(jī)制，為非洲豬瘟疫苗靶基因篩選提供依據(jù)與參考。

本研究首先采用熒光素酶實(shí)驗(yàn)及WB檢測(cè)，結(jié)果顯示，異位表達(dá)的ASFV E120R蛋白可抑制cGAS-STING介導(dǎo)的IFN-β和NF-κB啟動(dòng)子活性（p<0.01），熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示其可降低IFN-β、及干擾素刺激基因ISG54和ISG56的轉(zhuǎn)錄（p<0.01），從而調(diào)節(jié)先天性抗病毒反應(yīng)。隨后，研究發(fā)現(xiàn)ASFV的E120R蛋白可通過靶向IRF3及其下游，抑制IFN-β信號(hào)通路；而靶向p65來抑制TBK1、IKKβ、and p65介導(dǎo)的NF-κB的活化（p<0.01）。進(jìn)一步研究顯示，ASFV的E120R蛋白可通過抑制STING、TBK1及IRF3的磷酸化（p<0.01），而p65磷酸化未受影響(p>0.05)，表明ASFV E120R蛋白可以通過抑制cGAS‐STING信號(hào)通路的關(guān)鍵點(diǎn)(如STING、IRF3和TBK1)的磷酸化來抑制IFN-β信號(hào)通路。NF-κB信號(hào)通路的活化需要p65 和 p50進(jìn)行核移位，ASFV的E120R蛋白可通過抑制p50和p65的核轉(zhuǎn)移從而對(duì)NF-κB信號(hào)通路產(chǎn)生負(fù)調(diào)控，從而抑制NF-κB信號(hào)通路。最后，將ASFV E120R蛋白進(jìn)行截短表達(dá)，結(jié)果顯示該蛋白C-末端第61~80 aa發(fā)揮作用，抑制NF‐κB啟動(dòng)子活性和下調(diào)cGAS和STING誘導(dǎo)的IFN‐ β- luc啟動(dòng)子活性，表明ASFV E120R蛋白C-末端第61~80 aa為發(fā)揮免疫逃避效應(yīng)的主要作用區(qū)域。

ASFV龐大而復(fù)雜的基因組、功能未知的蛋白及尚不明確的發(fā)病機(jī)制和免疫逃避機(jī)制為疫苗及藥物的研發(fā)帶來巨大的困難。在本研究中，我們初步闡明了ASFV E120R抑制宿主先天免疫應(yīng)答的新機(jī)制，為ASFV基因缺失活疫苗的研發(fā)提供新的靶點(diǎn)，為預(yù)防ASFV提供理論基礎(chǔ)。

朱鴻飛，本文通訊作者，研究員，博士生導(dǎo)師，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所獸醫(yī)公共衛(wèi)生安全與管理團(tuán)隊(duì)首席科學(xué)家。

現(xiàn)兼任“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“非洲豬瘟等外來動(dòng)物疫病防控科技支撐”應(yīng)急項(xiàng)目聯(lián)合攻關(guān)組組長(zhǎng)，“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃《畜禽重大疫病防控與高效安全養(yǎng)殖綜合技術(shù)研發(fā)》重點(diǎn)專項(xiàng)戰(zhàn)略咨詢和指南編寫專家，農(nóng)業(yè)部第九屆科技委員會(huì)委員，國(guó)家科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)辦公室終審評(píng)審專家，“十四五”國(guó)家研發(fā)計(jì)劃“非洲豬瘟基因缺失疫苗研發(fā)”項(xiàng)目主持人、“十三五”國(guó)家研發(fā)計(jì)劃“非洲豬瘟等外來動(dòng)物疫病防控科技支撐”應(yīng)急項(xiàng)目主持人，“十二五”國(guó)家863計(jì)劃現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域“動(dòng)物疫病分子診斷技術(shù)研究與產(chǎn)品創(chuàng)制”主題項(xiàng)目首席科學(xué)家，“十一五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃重大項(xiàng)目“地震災(zāi)后畜禽養(yǎng)殖及疫病防控技術(shù)研究”主持人，中、英農(nóng)業(yè)科技合作項(xiàng)目“非洲豬瘟的快速診斷和控制技術(shù)”主持人。主持完成的“羊棘球蚴病基因工程亞單位疫苗”獲農(nóng)業(yè)部一類新獸藥注冊(cè)證書（第1完成人），“雞馬立克氏病三價(jià)活疫苗”獲農(nóng)業(yè)部二類新獸藥注冊(cè)證書（第2完成人）。獲得國(guó)家發(fā)明專利9項(xiàng)，實(shí)用新型專利10項(xiàng)，先后在國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)刊物上發(fā)表論文90余篇，其中SCI論文30余篇。